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克隆與突變
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產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品編號
規(guī)格
T4 DNA Ligase(5U/μL)
HRF0202
100 U
HRF0203
300 U
產(chǎn)品說明
T4 DNA Ligase(5U/μL)是從表達(dá)T4 DNA Ligase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)表后分離純化而來的。它催化相鄰DNA鏈的的5' -磷酸末端和3'-羥基末端以磷酸二酯鍵結(jié)合反應(yīng)。該酶催化平滑末端或粘性末端DNA的連接,修復(fù)雙鏈DNA、RNA、DNA/RNA 雜交中的單鏈中的單鏈切口。
適用范圍
1.DNA片段和載體DNA快速連接:
2.限制酶切片段的克隆;
3.將DNA片段與Linker或Adaptor連接。
緩沖液
酶貯存緩沖液:20mM Tris-HCl (pH7.5),0.1 mM EDTA,1mM DTT,50 mM KCl,50% glycerol。
10×Ligation Buffer:400 mM Tris-HCl,100 mM MgCl2,100 mM DTT,5 mM ATP (pH7.8),其他成分。
建議連接反應(yīng)體系:(以10 μL反應(yīng)體系為例)
標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)管
陽性對照管
Vector
μL
PCR產(chǎn)物
n μLl**
/
對照插入DNA片段
1 μL
T4 DNA連接酬(5U/ul)
2-5 U
10×Ligation Buffer
加去離子水至終體積
10 μL
反應(yīng)循環(huán)的設(shè)置
粘端連接: 22℃反應(yīng)10分鐘(可根據(jù)需要延長到1小時)
平端連接: 22℃反應(yīng)2小時或16°C過夜。
運輸和保存方法
冰袋運輸。-20℃ (保存6個月)。
注意事項
1)為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
2)本產(chǎn)品僅作科研用途!
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