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如何判斷ELISA實驗是否成功?

更新時間:2025-11-05  |  點擊率:89
  如何判斷ELISA實驗是否成功?
 
  ELISA實驗成功的判斷需結合‌陰性/陽性對照有效性‌、‌標準曲線質量‌及‌樣本結果可靠性‌,具體標準如下:
 
  1. 對照有效性驗證‌
 
  陰性對照‌:OD值應接近空白孔(通常≤0.1),且無假陽性信號‌。
 
  陽性對照‌:OD值需顯著高于Cut-off值(如P/N比值≥2),證明試劑活性正常‌。
 
  Cut-off值判定‌:樣本OD值≥陰性對照均值+2~3SD(或按試劑說明書閾值)判為陽性‌。
 
  2. 標準曲線質量‌
 
  線性范圍‌:R²≥0.99,且樣本OD值落在標準曲線線性區間內。
 
  梯度合理性‌:標準品OD值應隨濃度遞增呈規律性變化,無跳孔或異常波動‌。
 
  3. 樣本結果可靠性‌
 
  重復性‌:同一樣本重復孔間OD值差異應<20%‌。
 
  信號強度‌:樣本OD值需顯著高于陰性對照(競爭法則相反),若信號過弱需復測或調整樣本濃度‌。
 
  4. 常見失敗原因‌
 
  假陽性/陰性‌:洗滌不凈、封閉不足或抗體交叉反應‌。
 
  曲線異常‌:標準品失效、孵育時間不足或酶標板污染‌。
 
  5. 結果表示方法‌
 
  定性‌:陰陽性判定(如OD值>Cut-off值)‌。
 
  定量‌:通過標準曲線計算濃度,需標注稀釋倍數。
 
  若需進一步優化實驗,可參考:ELISA實驗操作視頻。
 
  注:以上僅供參考,不作為實際數據,實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。
 
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